1.动物实验

1.1动物选择

选用成年动物，常用小鼠（26±2g）或大鼠（180 20g），单一性别，大鼠每组8-12只、小鼠每组10-15只。

1.2材料

2.1试剂

四氧嘧啶(或链脲霉素) 小鼠35-50mg/kg.bw.iv (100-160mg/kg.bw.ip)、大鼠50–80mg/kg.bw.iv (200-250mg/kg.bw.ip)用前新鲜配制。

血糖测定试纸或试剂盒。

1.2.2仪器

血糖仪、全自动生化仪、721-B型分光光度计。

1.3剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组和一个空白对照组，以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。同时设给予受试样品高剂量的正常动物组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天

1.4实验方法

1.4.1降低空腹血糖实验

1.4.1.1高血糖模型动物

1.4.1.1.1原理

四氧嘧啶(或链脲霉素)是一种ß细胞毒剂，可选择性地损伤多种动物的胰岛 细胞，造成胰岛素分泌低下，引起实验性糖尿病。

1.4.1.1.2造型

动物禁食24小时后，给予四氧嘧啶造型，5-7天后禁食3-5小时，测血糖，血糖值10－25mmol/L为高血糖模型成功动物。

1.4.1.1.3操作步骤

选高血糖模型动物按禁食3-5小时的血糖水平分组，随机选1个模型对照组和3个剂量组(组间差不大于1.1mmol/L)。剂量组给予不同浓度受试样品，模型对照组给予溶剂，连续30天，测空腹血糖值(禁食同实验前)，比较各组动物血糖值及血糖下降百分率。血糖下降百分率=（实验前血糖值－实验后血糖值）／实验前血糖值×100％。

1.4.1.2正常动物

选健康成年动物按禁食3-5小时的血糖水平分组，随机选1个对照组和1个受试样品组(高剂量)。余操作同1.4.1.1.3。

1.4.2糖耐量实验

高血糖模型动物禁食3-5小时，剂量组给予不同浓度受试样品，模型对照组给予同体积溶剂,15-20分钟后经口给予葡萄糖2.0g/kg或医用淀粉3-5g/kg，测定给葡萄糖后0、0.5、2小时的血糖值或给医用淀粉后0、1、2小时的血糖值，观察模型对照组与受试样品组给葡萄糖或医用淀粉后各时间点血糖曲线下面积的变化。

血糖曲线下面积＝1/2×(0小时血糖值＋0.5小时血糖值)×0.5＋1/2×(2小时血糖值＋0.5小时血糖值)×1.5＝0.25×(0小时血糖值+4×0.5小时血糖值+3×2小时血糖值)

1.5数据处理及结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

降空腹血糖实验：受试样品剂量组与对照组比较，空腹血糖实测值降低或血糖下降百分率有统计学意义，可判定该受试样品降空腹血糖实验结果阳性。

糖耐量实验：受试样品剂量组与对照组比较，在给葡萄糖或医用淀粉后0.0、0.5、2.0小时血糖曲线下面积降低有统计学意义，可判定该受试样品糖耐量实验结果阳性。

1.6注意事项

1.6.1为了使实验动物糖代谢功能状态尽量保持一致，也为了准确地按体重计算受试样品的用量，实验前动物应严格禁食(不禁水)，实验前后禁食条件应一致，鼠类在禁食的同时应更换衬垫物。

1.6.2血糖测定用试纸或试剂盒，按说明书操作；若自行配制试剂,按〖附1〗操作。

1.6.3如用血清样品进行测定，应于取血后30分钟内分离血清，分离后血清的含糖量在6小时内不变。用血清制备的无蛋白血滤液可保存48小时以上。

1.6.4高浓度的还原性物质如Vit C亦能与色素原竞争游离氧，干扰反应，使结果偏低。血红蛋白能使过氧化氢过早分解，亦干扰反应，致使测得血糖值偏低。故对已溶血的全血或血清必须制备无蛋白滤液后，再进行测定。